Ar 1193 Electroporation-Competent Cell 發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞簡要說明：

基因型：Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri(agropine type.

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時具有ka那霉素抗性。Ar 1193發(fā)根農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)特別適用于大質粒的轉化：經(jīng)pK7WGF2質粒 (size：11876 bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。

Electroporation發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞操作說明：

一：0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。

二：取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質粒DNA（體積不大于6ul，建議用試劑盒抽提，雙蒸水溶解；轉化效率較高，第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量），用手打管底混勻，立即插入冰中，用200μl槍頭將感受態(tài)-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。

三：啟動電轉儀，設置參數(shù)：C=25μF，PC=200ohm，V=2400V（此參數(shù)為Biorad推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉槽中，啟動電擊，電擊完成快速插入冰中，加入1ml無抗生素的TY，并轉移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

四：6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。

Electroporation發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞注意事項：

一：加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數(shù)量級。

二：電轉感受態(tài)細胞中不可混入氣泡，轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

三：平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或最終用于涂板的菌量。

四：Ar 1193具有霉素、霉素抗性，不可用于具有霉素抗性或霉素抗性質粒的轉化。